食用植物油衛生標準的分析方法

【GB/T 5009.37—1996】
　　1　主題內容與適用范圍
　　本標準規定了食用植物油衛生指標的分析方法。
　　本標準適用于食用植物油衛生指標的分析。
　　殘留溶劑的最低檢出量為0.1mg/kg。
　　2　引用標準
　　GB 2716　食用植物油衛生標準
　　GB/T 5009.11　食品中總砷的測定方法
　　GB/T 5009.22　食品中黃曲霉毒素B1的測定
　　GB/T 5009.27　食品中苯并(a)芘的測定方法
　　3　感官檢查
　　3.1　色澤
　　3.1.1　儀器
　　燒杯：直徑50mm，杯高100mm。
　　3.1.2　分析步驟
　　將樣品混勻并過(guò)濾，然后倒入燒杯中，油層高度不得小于5mm，在室溫下先對著(zhù)自然光觀(guān)察，然后再置于白色背景前借其反射光線(xiàn)觀(guān)察并按下列詞句記述：白色、灰白色、檸檬色、淡黃色、黃色、橙色、棕黃色、棕色、棕紅色、棕褐色等。
　　3.2　氣味及滋味
　　3.2.1　分析步驟
　　將樣品倒入150mL燒杯中，置于水浴上，加熱至50℃，以玻璃棒迅速攪拌。嗅其氣味，并蘸取少許樣品，辨嘗其滋味，然后按正常、焦糊、酸敗、苦辣等詞句記述。
　　4　理化檢驗
　　4.1　酸價(jià)
　　4.1.1　原理
　　植物油中的游離脂肪酸用氫氧化鉀標準溶液滴定，每克植物油消耗氫氧化鉀的毫克數，稱(chēng)為酸價(jià)。
　　4.1.2　試劑
　　4.1.2.1　乙醚－乙醇混合液：按乙醚－乙醇(2＋1)混合。用氫氧化鉀溶液(3g/L)中和至酚酞指示液呈中性。
　　4.1.2.2　氫氧化鉀標準滴定溶液〔c(KOH)＝0.05mol/L〕。
　　4.1.2.3　酚酞指示液：10g/L乙醇溶液。
　　4.1.3　分析步驟
　　準確稱(chēng)取3.00～5.00g樣品，置于錐形瓶中，加入50mL中性乙醚－乙醇混合液，振搖使油溶解，必要時(shí)可置熱水中，溫熱促其溶解。冷至室溫，加入酚酞指示液2～3滴，以氫氧化鉀標準滴定溶液(0.05mol/L)滴定，至初現微紅色，且0.5min內不褪色為終點(diǎn)。
　　4.1.4　計算
　　

　　式中：X1——樣品的酸價(jià)；
　　V1——樣品消耗氫氧化鉀標準滴定溶液體積，mL；
　　c1——氫氧化鉀標準滴定的實(shí)際濃度，mol/L；
　　m1——樣品質(zhì)量，g；
　　56.11——與1.0mL氫氧化鉀標準滴定溶液［c(KOH)＝1.000mol/L］相當的氫氧化鉀毫克數。
　　結果的表述：報告算術(shù)平均值的二位有效數。
　　4.1.5　允許差
　　相對相差≤10%。
　　4.2　過(guò)氧化值
　　4.2.1　原理
　　油脂氧化過(guò)程中產(chǎn)生過(guò)氧化物，與碘化鉀作用，生成游離碘，以硫代硫酸鈉溶液滴定，計算含量。
　　4.2.2　試劑
　　4.2.2.1　飽和碘化鉀溶液：稱(chēng)取14g碘化鉀，加10mL水溶解，必要時(shí)微熱使其溶解，冷卻后貯于棕色瓶中。
　　4.2.2.2　三氯甲烷－冰乙酸混合液：量取40mL三氯甲烷，加60mL冰乙酸，混勻。
　　4.2.2.3　硫代硫酸鈉標準滴定溶液［c(Na2S2O3)＝0.002mol/L］。
　　4.2.2.4　淀粉指示劑(10g/L)：稱(chēng)取可溶性淀粉0.5g，加少許水，調成糊狀，倒入50mL沸水中調勻，煮沸。臨用時(shí)現配。
　　4.2.3　分析步驟
　　稱(chēng)取2.00～3.00g混勻(必要時(shí)過(guò)濾)的樣品，置于250mL碘瓶中，加30mL三氯甲烷－冰乙酸混合液，使樣品完全溶解。加入1.00mL飽和碘化鉀溶液，緊密塞好瓶蓋，并輕輕振搖0.5min，然后在暗處放置3min。取出加100mL水，搖勻，立即用硫代硫酸鈉標準滴定溶液(0.002mol/L)滴定，至淡黃色時(shí)，加1mL淀粉指示液，繼續滴定至藍色消失為終點(diǎn)，取相同量三氯甲烷－冰乙酸溶液、碘化鉀溶液、水，按同一方法，做試劑空白試驗。
　　4.2.4　計算
　　
　　式中：X2——樣品的過(guò)氧化值，g/100g；
　　X3——樣品的過(guò)氧化值，meq/kg；
　　V2——樣品消耗硫代硫酸鈉標準滴定溶液體積，mL；
　　V3——試劑空白消耗硫代硫酸鈉標準滴定溶液體積，mL；
　　c2——硫代硫酸鈉標準滴定溶液的濃度，mol/L；
　　m2——樣品質(zhì)量，g；
　　0.1269——與1.00 mL硫代硫酸鈉標準滴定溶液[c(Na2S2O3)=1.000 mol/L]相當的碘的質(zhì)量，g；；
　　78.8——換算因子。
　　結果的表述：報告算術(shù)平均值的二位有效數。
　　4.2.5　允許差
　　相對相差≤10%。
　　4.3　羰基價(jià)
　　4.3.1　原理
　　羰基化合物和2，4－二硝基苯肼的反應產(chǎn)物，在堿性溶液中形成褐紅色或酒紅色，在440nm下，測定吸光度，計算羰基價(jià)。
　　4.3.2　試劑
　　4.3.2.1　精制乙醇：取1000mL無(wú)水乙醇，置于2000mL圓底燒瓶中，加入5g鋁粉、10g氫氧化鉀，接好標準磨口的回流冷凝管，水浴中加熱回流1h，然后用全玻璃蒸餾裝置，蒸餾收集餾液。
　　4.3.2.2　精制苯：取500mL苯，置于1000mL分液漏斗中，加入50mL硫酸，小心振搖5min，開(kāi)始振搖時(shí)注意放氣。靜置分層，棄除硫酸層，再加50mL硫酸重復處理一次，將苯層移入另一分液漏斗，用水洗滌三次，然后經(jīng)無(wú)水硫酸鈉脫水，用全玻璃蒸餾裝置蒸餾收集餾液。
　　4.3.2.3　2，4－二硝基苯肼溶液：稱(chēng)取50mg2，4－二硝基苯肼，溶于100mL精制苯中。
　　4.3.2.4　三氯乙酸溶液：稱(chēng)取4.3g固體三氯乙酸，加100mL精制苯溶解。
　　4.3.2.5　氫氧化鉀－乙醇溶液：稱(chēng)取4g氫氧化鉀，加100mL精制乙醇使其溶解，置冷暗處過(guò)夜，取上部澄清液使用。溶液變黃褐色則應重新配制。
　　4.3.2.6　三苯膦溶液(0.5g/L)：稱(chēng)取100mg的三苯膦用苯溶解后轉入200mL容量瓶中并定容至刻度。
　　4.3.3　儀器
　　分光光度計
　　4.3.4　分析步驟
　　稱(chēng)取約0.025～0.10g樣品，置于25mL具塞試管中，加入5mL三苯膦溶液(0.5g/L)(三苯膦還原氫過(guò)氧化物為非羰基化合物)溶解樣品，室溫暗處放置30min，再加3mL三氯乙酸溶液及5mL2，4－二硝基苯肼溶液，仔細振搖混勻，在60℃水浴中加熱30min，冷卻后，沿試管壁慢慢加入10mL氫氧化鉀－乙醇溶液，使成為二液層，塞好，劇烈振搖混勻，放置10min。以1cm比色杯，用不含三苯膦的試劑空白調節零點(diǎn)，含三苯膦還原劑的試劑空白吸收作校正于波長(cháng)440nm處測吸光度。
　　4.3.5　計算
　　
　　式中：X4——樣品的羰基價(jià)，mmol/kg；
　　A1——測定時(shí)樣液吸光度；
　　m2——樣品質(zhì)量，g；
　　V4——測定用樣品液的體積，mL；
　　854——各種醛的毫摩爾數的平均值。
　　結果的表述：報告算術(shù)平均值的三位有效數。
　　4.3.6　允許差
　　相對相差≤5%。
　　4.4　游離棉酚(本法適用于棉籽油)。
　　4.4.1　紫外分光光度法
　　4.4.1.1　原理
　　樣品中游離棉酚經(jīng)用丙酮提取后，在378nm有最大吸收，其吸收值與棉酚量在一定范圍內成正比，與標準系列比較定量。
　　4.4.1.2　儀器。
　　紫外分光光計。
　　4.4.1.3　試劑
　　4.4.1.3.1　丙酮(70%)：將350mL丙酮加水稀釋至500mL。
　　4.4.1.3.2　棉酚標準溶液：準確稱(chēng)取0.1g棉酚，置于100mL容量瓶中，加丙酮(70%)溶解并稀釋至刻度。此溶液每毫升相當于1mg棉酚。
　　4.4.1.3.3　棉酚標準使用液：吸取棉酚標準溶液5.0mL，置于100mL容量瓶中，加丙酮(70%)稀釋至刻度。此溶液每毫升相當于50.0μg棉酚。
　　4.4.1.4　分析步驟
　　稱(chēng)取1.00g精制棉油或0.20g粗棉油，置于100mL具塞錐形瓶中，加入20.0mL丙酮(70%)，并加入玻璃珠3～5粒，在電動(dòng)振蕩器上振蕩30min，然后在冰箱中放置過(guò)夜。取此提取液之上清液，過(guò)濾。
　　吸取0，0.1，0.2，0.4，0.8，1.6，2.4mL棉酚標準使用液(相當于0，5，10，20，40，80，120μg棉酚)，分別置于10mL具塞試管中。各加入丙酮(70%)至10mL，混勻，靜置10min。取濾液及標準液于1cm石英比色杯中，以丙酮(70%)調節零點(diǎn)于378nm波長(cháng)處，測吸光度，繪制標準曲線(xiàn)比較。
　　4.4.1.5　計算
　　
　　式中：X5——樣品中游離棉酚的含量，g/100g；
　　m3——測定用樣液中游離棉酚的質(zhì)量，μg；
　　m4——樣品質(zhì)量，g。
　　結果的表述：報告算術(shù)平均值的三位有效數。
　　4.4.1.6　允許差
　　相對相差≤10%。
　　4.4.2　苯胺法
　　4.4.2.1　原理
　　樣品中游離棉酚經(jīng)提取后，在乙醇溶液中與苯胺形成黃色化合物，與標準系列比較定量。
　　4.4.2.2　試劑
　　4.4.2.2.1　丙酮(70%)：量取70mL丙酮，加水至100mL。
　　4.4.2.2.2　乙醇(95%)。
　　4.4.2.2.3　苯胺：應為無(wú)色或淡黃；若色深則重蒸餾。
　　4.4.2.2.4　棉酚標準溶液：同4.4.1.3.2和4.4.1.3.3。
　　4.4.2.3　分析步驟
　　稱(chēng)取約1.00g樣品，置于150mL具塞錐形瓶中，加入20.0mL丙酮(70%)，加入玻璃珠3～5粒，劇烈振搖1h，在冰箱中過(guò)夜，過(guò)濾，濾液備用。
　　在兩支25mL具塞比色管中，各加入2.0mL上述濾液。以甲管為樣品管，乙管為對照管。另吸取0，0.10，0.20，0.40，0.80，1.00mL棉酚標準使用液(相當0，5，10，20，40，50μg棉酚)各兩份，分別置于甲、乙兩組25mL具塞比色管中，各管均加入丙酮(70%)至2mL，甲組標準管與樣品管甲管各加入3mL苯胺，在80℃水浴中加熱15min，取出冷至室溫，各加入乙醇至25mL；乙組標準管與樣品管乙管各加乙醇至25mL。兩組溶液在加乙醇后均放置15min，以甲組標準的零管為試劑空白，以乙組的零管為溶劑空白，用1cm比色杯，以各組標準零管調節零點(diǎn)，在波長(cháng)445nm處，測定兩組的吸光度，以?xún)山M對應的吸光度之差，以及相應標準濃度繪制標準曲線(xiàn)，以樣品管甲管與乙管的吸光度之差從標準曲線(xiàn)查出棉酚含量。
　　4.4.2.4　計算
　　
　　式中：X6——樣品中游離棉酚的含量，g/100g；
　　m5——測定用樣液中游離棉酚的質(zhì)量，μg；
　　m6——樣品質(zhì)量，g。
　　結果的表述：同4.4.1.5。
　　4.4.2.5　允許差
　　同4.4.1.6。
　　4.5　砷
　　按GB/T 5009.11操作。
　　4.6　黃曲霉毒素B1
　　按GB/T 5009.22操作。
　　4.7　苯并(a)芘
　　按GB/T 5009.27操作。
　　4.8　殘留溶劑
　　4.8.1　原理
　　將植物油樣品放入密封的平衡瓶中，在一定溫度下，使殘留溶劑氣化達到平衡時(shí)，取液上氣體注入氣相色譜中測定，與標準曲線(xiàn)比較定量。
　　4.8.2　試劑
　　4.8.2.1　N－N－二甲基乙酰胺(簡(jiǎn)稱(chēng)DMA)：吸取1mL放入100～150mL頂空瓶中，在50℃放置0.5h，取液上氣0.1mL注入氣相色譜儀在0～4min內無(wú)干擾即可使用。如有干擾可用超聲波處理30min或通入氮氣用曝氣法蒸去干擾。
　　4.8.2.2　六號溶劑標準溶液：稱(chēng)取洗凈干燥的具塞20～25mL氣化瓶的質(zhì)量為A，瓶中放入比氣化瓶體積少1mL的DMA密塞后稱(chēng)量為B，用1mL的注射器取約0.5mL六號溶劑標準通過(guò)塞注入瓶中(不要與溶液接觸)，混勻，準確稱(chēng)量為C。用下式計算六號溶劑油的濃度：
　　
　　式中：X7——六號溶劑的濃度，mg/mL。
　　m7——瓶和塞的質(zhì)量，g；
　　m6——瓶、塞和DMA的質(zhì)量，g；
　　m5——B加六號溶劑的質(zhì)量，g；
　　0.935——DMA在20℃時(shí)密度，g/mL。
　　4.8.3　儀器
　　4.8.3.1　氣化瓶(頂空瓶)：體積為100～150mL，具塞。
　　氣密性試驗：把1mL己烷放入瓶中，密塞后放入60℃熱水中30min，密封處無(wú)氣泡外漏。
　　4.8.3.2　氣相色譜儀：(帶氫火焰離子化檢測器)。
　　4.8.4　分析步驟
　　4.8.4.1　氣相色譜參考條件
　　4.8.4.1.1　色譜柱：不銹鋼柱，內徑3mm，長(cháng)3m，內裝涂有5%DEGS的白色擔體102(60～80目)。
　　4.8.4.1.2　檢測器：氫火焰離子化檢測器。
　　4.8.4.1.3　柱溫：60℃。
　　4.8.4.1.4　汽化室溫度：140℃。
　　4.8.4.1.5　載氣(N2)：30mL/min。
　　4.8.4.1.6　氫氣：50mL/min。
　　4.8.4.1.7　空氣：500mL/min。
　　4.8.4.2　測定：稱(chēng)取25.00g的食用油樣，密塞后于50℃恒溫箱中加熱30min，取出后立即用微量注射器或注射器吸取0.10～0.15mL液上氣體(與標準曲線(xiàn)進(jìn)樣體積一致)注入氣相色譜，記錄單組分或多組分(用歸一化法)測量峰高或峰面積，與標準曲線(xiàn)比較，求出液上氣體六號溶劑的含量。
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　　4.8.4.3　標準曲線(xiàn)的繪制
　　取預先在氣相色譜儀上測試管六號溶劑量較低的油為曲線(xiàn)制備的體底油(或經(jīng)70℃開(kāi)放式趕掉大部分殘留溶劑的食用油或壓榨油)，分別稱(chēng)取25.00g放入6只氣化瓶中，密塞。通過(guò)塞子注入六號溶劑標準液(4.8.2.2)0、20、40、60、80、100μL(含量分別為0，0.02×X7……0.10×X7μg)。放入50℃烘箱中，平衡30min，分別取液上氣體注入色譜，各響應值扣除空白值后，繪制標準曲線(xiàn)(多個(gè)色譜峰用歸一化法計算)。
　　4.8.5　計算
　　
　　式中：X8——油樣中六號溶劑的含量，mg/kg；
　　m8——測定氣化瓶中六號溶劑的質(zhì)量，μg；
　　m9——樣品質(zhì)量，g。
　　結果的表述：報告算術(shù)平均值的三位有效數。
　　4.8.6　允許差
　　相對相差≤15%。
　　4.9　鎳(適用于人造奶油)
　　4.9.1　原理
　　樣品中的鎳用稀酸提取后，在強堿性溶液中以過(guò)硫酸銨為氧化劑，鎳與丁二酮肟形成紅褐色絡(luò )合物，與標準系列比較定量。
　　4.9.2　試劑
　　4.9.2.1　鹽酸(1＋23)：量取4mL鹽酸加水稀釋至96mL。
　　4.9.2.2　石油醚：沸程30～60℃。
　　4.9.2.3　檸檬酸鈉溶液(100g/L)。
　　4.9.2.4　酚紅指示液(1g/L)：稱(chēng)取0.1g酚紅用乙醇(20%)溶解后稀釋至100mL。
　　4.9.2.5　氨水。
　　4.9.2.6　丁二酮肟(C4H3N2O2)－乙醇溶液(10g/L)。
　　4.9.2.7　三氯甲烷。
　　4.9.2.8　氨水(1＋10)。
　　4.9.2.9　酒石酸鉀鈉溶液(500g/L)。
　　4.9.2.10　氫氧化鈉溶液(100g/L)。
　　4.9.2.11　過(guò)硫酸銨溶液(60g/L)：臨用現配。
　　4.9.2.12　鎳標準溶液：準確稱(chēng)取0.1000g鎳粉或0.4954g硝酸鎳〔Ni(NO3)2•6H2O〕溶于少量鹽酸(1＋23)，移入1000mL容量瓶中，并用鹽酸(1＋23)稀釋至刻度。此溶液每毫升相當于100.0μg鎳。
　　4.9.2.13　鎳標準使用液：吸取1.0mL鎳標準溶液置于100mL容量瓶中，以鹽酸(1＋23)稀釋至刻度。此溶液每毫升相當于1.0μg鎳。
　　4.9.3　儀器
　　所有玻璃儀器先用硝酸(1＋1)浸泡4h，再以水沖洗干凈。
　　4.9.3.1　電動(dòng)振蕩器。
　　4.9.3.2　分光光度計。
　　4.9.4　分析步驟
　　4.9.4.1　樣品處理
　　稱(chēng)取50.00g經(jīng)水浴上加熱融化的樣品，置于125mL具塞錐形瓶中，加30mL鹽酸(1＋23)，置80℃水浴中，加熱10min，趁熱置振蕩器上振蕩30min，再置水浴中待油層與水層分離后，倒入125mL分液漏斗中，靜置分層后，水層放入第二只分液漏斗中，油層再倒回原錐形瓶中，再加10mL鹽酸(1＋23)，置80℃水浴中，加熱5min，再振蕩10min，再置水浴中分層后，仍倒入第一只分液漏斗中，水層并入第二只分液漏斗中，棄去油層。
　　4.9.4.2　去脂
　　第二分液漏斗中樣品提取液冷卻后，加15mL石油醚，振蕩1min，分層后棄去石油醚。
　　4.9.4.3　提純
　　于提取液中加3滴酚紅指示液，5mL檸檬酸鈉溶液(100g/L)，滴加氨水，使溶液由紅變黃再變紅后，再滴加2～4滴，使溶液pH為8.5～10，再加2mL丁二酮肟－乙醇溶液(10g/L)，振搖1min后，用三氯甲烷提取3次，每次5mL，振搖2min，合并三氯甲烷，置于50mL分液漏斗中，加10mL1∶10氨水振搖1min，靜置分層后棄去氨水，將三氯甲烷分入另一分液漏斗中，用鹽酸(1＋23)提取2次，每次2.5mL，振搖2min，使三氯甲烷中的鎳轉入酸液中，棄去三氯甲烷，收集酸液于10mL具塞比色管中。
　　4.9.4.4　測定
　　吸取0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL鎳標準使用液(相當0，0.5，1，2，3，4，5μg鎳)，分別置于10mL具塞比色管中，分別加鹽酸(1＋23)至5mL。
　　于樣品及標準管中分別依次加入0.5mL酒石酸鉀鈉溶液(500g/L)，1.5mL氫氧化鈉溶液(100g/L)，0.5mL過(guò)硫酸銨溶液(60g/L)，混勻，放置3min。再各加入0.2mL丁二酮肟乙醇溶液(10g/L)，加水至10mL，混勻。放置15min后，用3cm比色杯，以水調節零點(diǎn)，于波長(cháng)470nm處測吸光度，繪制標準曲線(xiàn)比較。
　　4.9.4.5　計算
　　
　　式中：X9——樣品中鎳的含量，mg/kg；
　　m10——測定用樣品鎳的質(zhì)量，μg；
　　m11——樣品質(zhì)量，g。
　　結果的表述：報告算術(shù)平均值的二位有效數。
　　4.9.4.6　允許差
　　相對相差≤10%。
　　4.10　油中非食用油的鑒別
　　對常見(jiàn)的三類(lèi)非食用油進(jìn)行定性鑒別。
　　4.10.1　桐油
　　4.10.1.1　三氯化銻－三氯甲烷界面法：取油樣1mL移入試管中。沿試管壁加1mL三氯化銻－三氯甲烷溶液(10g/L)，使試管內溶液分成兩層，然后在水浴中加熱約10min如有桐油存在，則溶液兩層分界面上出現紫紅色至深咖啡色環(huán)。
　　4.10.1.2　亞硝酸法：適用于豆油、棉油等深色油中桐油的檢出，但不適用于梓油或芝麻油中桐油的檢出。取樣品5～10滴于試管中，加2mL石油醚，使油溶解，有沉淀物時(shí)，過(guò)濾一次，然后加入結晶亞硝酸鈉少許，并加入1mL硫酸(1＋1)搖勻，靜置，如有桐油存在，油液混濁，并有絮狀沉淀物，開(kāi)始呈白色，放置后變黃色。
　　4.10.1.3　硫酸法：取樣品數滴，置白瓷板之上，加硫酸1～2滴，如有桐油存在，則出現深紅色并且凝成固體，顏色漸加深，最后成炭黑色。
　　4.10.2　礦物油
　　取1mL樣品，置于錐形瓶中，加入1mL氫氧化鉀溶液(600g/L)及25mL乙醇，接空氣冷凝管回流皂化約5min，皂化時(shí)應振搖使加熱均勻。皂化后加25mL沸水，搖勻，如渾濁或有油狀物析出，表示有不能皂化的礦物油存在。
　　4.10.3　大麻油
　　取樣品和對照大麻油各10μL，點(diǎn)樣于硅膠G薄層板，此薄層板厚0.25～0.3mm，105℃下活化半小時(shí)。油太粘稠則用5倍苯稀釋?zhuān)�再進(jìn)行點(diǎn)樣，點(diǎn)樣量稍多一點(diǎn)約10～20μL。展開(kāi)劑用苯，顯色劑為牢固藍鹽B溶液(1.5g/L)(臨用配制)。當斑點(diǎn)和對照顏色及比移值相當時(shí)表示有大麻油。
　　胡麻油、芝麻油和牢固藍鹽B也呈紅色，但在薄層板上比移值較小。
　　4.11　黃曲霉毒素
　　按GB/T 5009.22操作。
　　附加說(shuō)明：
　　本標準由衛生部衛生監督司提出。
　　　本標準由衛生部委托技術(shù)歸口單位衛生部食品衛生監督檢驗所負責解釋。